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PCR实验室规范化管理
分子生物学检验--最具挑战性的专业
是临床检验发展最快的专业
将是应用最广的专业
方兴未艾的专业
将是最具活力的专业
医疗机构临床基因扩增检验实验室工作导则
一、临床基因扩增检验实验室的设计
（一）临床基因扩增检验实验室区域设计原则
（二）临床基因扩增检验实验室的空气流向
（三）工作区域仪器设备配置标准。
二、临床基因扩增检验实验室工作基本原则
三、临床基因扩增检验实验室各区域工作注意事项
临床分子检验实验室日常管理的关键点
关键点一、防污染意识和措施
PCR技术最令人头痛的问题是污染，极其微量的污染即可造成假阳性的结果。如果形成气溶胶污染扩散，则可引起整个PCR实验室的污染，处理起来非常棘手，甚至要关闭实验室。
严格执行各区功能划分
1.试剂储存和准备区：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备。
2.标本制备区：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管。对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求。
3.扩增区：cDNA合成、DNA扩增及检测。
4.扩增产物分析区：扩增片段的进一步分析测定，如杂交、酶切电泳、变性高效液相分析、测序等。
● 物：特别是要承担部分科研工作的实验室
● 人：操作者、科主任、实习进修生、保洁员、患者（家属）……
● 工作流程：单一流向
● 操作规程：认真对待每一个细节
进入各工作区域应当严格按照单一方向进行，即试剂储存和准备区→标本制备区→扩增区→ 扩增产物分析区。
各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的设备、物品不得混用
不同的工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）。工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出。
实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区的方向进行。不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染
工作结束后，必须立即对工作区进行清洁（次氯酸钠）。实验台表面的紫外照射应当方便有效（可移动紫外灯，254nm波长），在工作完成后调至实验台上60～90cm内照射。
实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合《实验室生物安全通用要求》（GB19489-2008）。
注意事项：
试剂盒中的阳性对照品及质控品不应当保存在试剂储存和准备区 ，应当保存在标本处理区。
由于在样本混合、核酸纯化过程中可能会发生气溶胶所致的污染，可通过在标本制备区内设立正压条件，避免从邻近区进入本区的气溶胶污染。为避免样本间的交叉污染，加入待测核酸后，必须盖好含反应混合液的反应管。
必须注意的是，所有经过检测的反应管不得在扩增区打开。
必须注意避免通过扩增产物分析区的物品及工作服将扩增产物带出。
不规范操作案例：
阳性对照和标准品与试剂混放
关键点二、记录（内容、形式、保存）
1.试剂：出入库、质检、使用记录、自配试剂、高压消毒器械、结论、署名
2.仪器：（电子天平、低温冷冻高速离心机、水浴锅、移液器、离心机、超净台、混匀器等）使用情况记录、运行状况、结论（含校准、维护保养、维修记录，原始数据后附清单）
3.基本条件状况：温湿度、冰箱冷藏冷冻温度（绘图）、紫外灯照射累积时间（含超净台、传递窗和空气消毒灯）、可移动紫外灯照射累积时间及照射范围、结论、署名
4.标本：验收（含标本性状）、拒收及理由、特送标本双签字
5.质控（购买或自备、绘图时 X、SD、CV）
6. 实验过程记录单/表：（见下方图1、图2）
7.报告：具体方法学（实时荧光定量/定性PCR）、标本类型及性状说明、唯一编号、阴阳性及定量、参考范围/最低检测限的确定、送检时间（具体到时）、报告时间（具体到分）、备注（结果仅对此标本负责。如有疑问，请于一周内到PCR实验室查询！）
8.抱怨记录：应有时间、事件（项目）、接待人、处理方法、处理结果、处理人签字确认。
不规范操作案例：
关键点三、质量控制
SOP文件的现行有效性
仪器的标识维护保养
试剂及耗品的质检
.室内质控
1.管理文件部分：
工作制度
各种管理程序文件
各项工作程序及流程、标准操作程序（ SOP）
各种表格（Tab-1……）
注意事项：
操作人员必须熟悉掌握本实验室各项工作制度及SOP文件。当新版文件核准使用后，应将原文件及时收回。
一定做到：
写你所做的
做你所写的
记你所做的
分析所记的
改你分析的
2.关于标识：
实验室名称
各区名称
入口出口说明
禁入标识
单向说明及箭头
生物防护标识
生物防护垃圾袋
仪器运行绿色标签【注意：a.要比较明显的被看见、先考虑显而易见、再考虑美观 b.绿：正常运行、黄：暂停、红：停用】
重要仪器校验和档案标签
记录笔、纸、抹布、加样器、枪头盒等办公用品各区不同颜色标识标签
柜、凳标识
可移动仪器标识
（可以）总的和各区的规章制度上墙、上门，重要仪器的操作流程卡上墙
关键点四、档案管理
1.仪器档案
主要仪器应有：
（a）放置地点；
（b）制造商名称、型号、序号或其它唯一性标识；
（c）仪器使用说明书或其复印件；
（d）校准/检测的日期和结果以及下次校准和/或检测的日期；
（e）迄今所进行的维护和今后维护计划的细节；
（f）损坏、故障、改装或修理的历史。
加样器、温度计、温湿度计需出具计量局校正报告文件及复印件【可每品种有一套具备计量局的校正报告，并以此作为其它加样器、温湿度计的校正标准】【加样器要有出厂编号、使用时间、校正记录】
扩增仪需有仪器厂家提供进口医疗器械销售使用许可证，安装服务单、装机单，仪器说明书及复印件，专业技术人员维护校正报告和校正后参数，仪器维护后验证记录【用同一公司或校准试剂或用自制质控血清并记录数值】
高速低温冷冻离心机需出具计量局校正报告文件【转速、温度，校准、拟下次校准】
2.试剂档案
医疗药品生产许可证明，PCR试剂新药证书，PCR试剂生产许可证，PCR试剂使用说明书，试剂厂商或销售商的销售许可证。【应有厂家或厂家授权销售商的红色印章】
3.人员和技术档案
实验室主要负责人、实验室技术人员名单
简历表、培训档案，要求有实质性文件【如每人的学历证书及复印件、操作上岗证、科研成果（课题）、技术文章、获奖证书等的复印件。】
根据实际情况及时进行增补。
关键点五、学习培训
基础知识：如何设定阈值线？如何调整标准曲线？
专业新进展
报告结果的解释
正确对待临床和患者等方面的抱怨
关键点六、其他
报告单的审核与签发：编号唯一性、项目完整性、书写完整性
操作者和审核者有无PCR上岗资质？
检测结果的单位：
参考值/最低检测限：定量报告
……
作者：冯忠军
单位：河北医科大学第三医院检验科
如何建设PCR实验室？
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